Fundamentos del PRP y su
Aplicación en Reumatología
Lucía Gato Calvo
Jornada Cátedra BioIbérica de Ingeniería Tisular y Te...
¿Qué es el PRP?
Plasma Rico en Plaquetas
Volumen de plasma con un recuento plaquetario superior al de la
sangre periférica...
Plaquetas en a, c) reposo y b, d) activadas
Fuente: Bettache et al.2003; J Cell Sci 116(Pt 11):2277-
84 y Hughes et al.Blo...
Un poco de Historia
1997
Primera descripción de un
concentrado de plaquetas
como agente terapéutico
1998
Definición de “pl...
PRP: preparación
SISTEMA
Manual Automático
Abierto Cerrado
CIRCUITO
trombina
Mecánica Química Endógena
ACTIVACIÓN
rápida
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PRP: composición
leucocitosplaquetas
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crecimiento
Factor Actividades
PDGF Activación de macrófagos y angiogénesi...
Legislación aplicable al PRP
Directiva 2002/98/CE
Reglamento 2007/1394/CE
Directiva 2001/83/CE
Garantías mínimas para el u...
Aplicaciones del PRP
ARTROSIS: dosis óptima de plaquetas sin definir → Estandarización del medicamento
Estudios in vitro E...
Nuestra visión
OBJETIVO:
Definir la dosis óptima de plaquetas a aplicar en artrosis
y en defectos focales de cartílago.
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Nuestros estudios:
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Nuestros estudios:
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Efecto anti-inflamatorio Efecto cond...
UNIDAD CIBER-BBN:
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Dra. Elena F. Burguera
Grupo de Reumatología
INIBIC – Hospital Universitario de ...
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Jornada Cátedra BioIbérica de Ingeniería Tisular y Terapia Celular 18 de noviembre de 2015
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Fundamentos del PRP y su aplicación en Reumatología

Ponencia Lucía Gato Calvo
Published on: Mar 4, 2016
Published in: Health & Medicine      
Source: www.slideshare.net


Transcripts - Fundamentos del PRP y su aplicación en Reumatología

  • 1. Fundamentos del PRP y su Aplicación en Reumatología Lucía Gato Calvo Jornada Cátedra BioIbérica de Ingeniería Tisular y Terapia Celular 18 de noviembre de 2015
  • 2. ¿Qué es el PRP? Plasma Rico en Plaquetas Volumen de plasma con un recuento plaquetario superior al de la sangre periférica (150.000 – 350.000/µL) Plaquetas o Trombocitos Megacariocito y plaquetas Fuente: ASH Image Bank Diámetro: 2 – 3 µm Vida media: 7 – 12 días Funciones:  Coagulación y hemostasia  Vasoconstricción  Inflamación  Inmunidad  Angiogénesis  Regeneración tisular
  • 3. Plaquetas en a, c) reposo y b, d) activadas Fuente: Bettache et al.2003; J Cell Sci 116(Pt 11):2277- 84 y Hughes et al.Blood.2000; 96(1):188-194 Plaqueta Eritrocito Pared dañada del vaso Plaqueta activada Coágulo Fibrina Formación de un trombo para taponar un vaso sanguíneo dañado Fuente: www.merckmanuals.com Granúlos alfa (α), densos (δ, flechas), lisosomas (ly) y gránulos T con TLR9 y PDI (derecha) Fuente: Heijnen et al. J Thromb Haemost. 2015; 13:1-11 y Thon et al. J Cell Biol. 2012; 198(4):561-74 Gránulo Contenido Funciones α Proteínas adhesivas Fibrinógeno, vWF, trombospondina, fibronectina, vitronectina, TSP-1, laminina 8, SCUBE1 Hemostasia primaria y secundaria, coagulación, reparación de la herida, inflamación, angiogénesis, defensa inmunitaria Proteínas plasmáticas Albúmina, IgG Factores de crecimiento VEGF, PDGF, bFGF, TGF-β1, TGF-β2, EGF, HGF, IGF, angiopoyetina, CXCL12, MMP-1, MMP-2, MMP-9, heparanasa, SDF-1, fosfato de esfingosina, PF-4, TSP-1, angiostatina, endostatina, TIMP-1, TIMP-4, BMP-2, BMP-4, BMP-6, CTGF Quimioquinas proinflamatorias GRO-α, CXCL4, CXCL5, CXCL7, IL-8, SDF-1α, CCL2, MIP-1α, RANTES Factores y cofactores de coagulación Factor V/Va, factor XI, factor XIII, protrombina, quininógeno de alto peso molecular, multimerina Factores fibrinolíticos Plasmina, plasminógeno Factores antifibrinolíticos α₂-macroglobulina, α₂-antiplasmina, PAI-1, u-PA Inhibidores de coagulación Antitrombina, inhibidor C1, TFPI, proteína S, proteasa nexina-2 Proteínas inmunitarias Precursores de los complementos C3 y C4, inhibidor de C1, factor H, trombocidinas Proteínas de membrana Glicoproteína IIb/IIIa, GPVI, receptores Fc, PECAM, GPIb-IX-V, CD9, P-selectina, fibrocistina L, CD109 δ ADP, ATP, serotonina, histamina, Ca²⁺, tromboxano A₂, pirofosfato, polifosfato, 5- hidroxitriptamina, proteínas de membrana CD63, LAMP1/2, P-selectina, GPIb, integrina αII-β3, rab27a, rab27b Hemostasia primaria Lisosoma Catepsinas, hexosaminidasa, β-galactosidasa, arilsulfatasa, β-glucuronidasa, fosfatasa ácida, CD63, LAMP1/2 Digestión celular, fibrinólisis, degradación de matriz, remodelación de vasculatura T TLR9, PDI, VAMP-8 Defensa inmunitaria.
  • 4. Un poco de Historia 1997 Primera descripción de un concentrado de plaquetas como agente terapéutico 1998 Definición de “plasma rico en plaquetas”
  • 5. PRP: preparación SISTEMA Manual Automático Abierto Cerrado CIRCUITO trombina Mecánica Química Endógena ACTIVACIÓN rápida masiva lenta progresiva congelación descongelación 1 2 SIMPLE DOBLE FILTRADO SELECTIVO Recoger plasma Pellet de plaquetas METODOLOGÍA
  • 6. PRP: composición leucocitosplaquetas factoresde crecimiento Factor Actividades PDGF Activación de macrófagos y angiogénesis Quimiotaxis y proliferación de fibroblastos ↑Síntesis de colágeno de tipo I Proliferación de células mesenquimales TGF-β Proliferación de fibroblastos Quimiotaxis, proliferación y diferenciación de MSCs ↑Síntesis de colágeno tipo I y fibronectina Deposición de matriz ósea ↓Osteoclastogénesis y resorción ósea bFGF Proliferación celular Angiogénesis IGF-1 Quimiotaxis de fibroblastos ↑Síntesis proteica Proliferación y diferenciación de osteoblastos y MSCs IGF-2 Proliferación celular en la etapa fetal Foliculogénesis Neurogénesis VEGF Angiogénesis Migración y proliferación de células endoteliales Vasculogénesis Quimiotaxis de macrófagos y granulocitos Vasodilatación mediada por NO TSP-1 ↓Angiogénesis Factor Actividades EGF Proliferación celular Quimiotaxis y diferenciación de células epiteliales KGF Proliferación de keratinocitos CTGF Proliferación y diferenciación de condrocitos Adhesión celular Angiogénesis PF-4 ↓Angiogénesis ↓Proliferación endotelial Quimiotaxis de neutrófilos y fibroblastos Actividad anti-heparina HGF Angiogénesis Proliferación, motilidad y morfogénesis celular Ocn Regulación metabólica Formación de hueso On Formación de hueso Angiogénesis Proliferación y migración celular BMP-2, -4 y -6 Osteogénesis y osificación endocondral PDAF Vasculogénesis PDEGF Proliferación de keratinocitos y fibroblastos dérmicos ESTANDARIZACIÓN
  • 7. Legislación aplicable al PRP Directiva 2002/98/CE Reglamento 2007/1394/CE Directiva 2001/83/CE Garantías mínimas para el uso del plasma autólogo y sus fracciones Calidad de producción Sistema abierto: certificación de instalaciones, producción y control de calidad adecuados Sistema cerrado: seguir las instrucciones del kit comercial, que deberá disponer de marcado CE para cada uso Eficacia Necesidad de ensayos clínicos para establecer niveles de evidencia adecuados en cada patología y tipo de PRP Listado en colaboración con expertos de: - Aplicaciones con evidencias suficientes para recomendar el tratamiento con uno o varios tipos de PRP - Aplicaciones con beneficio/riesgo negativo en las que se recomienda no uso - Aplicaciones en las que se necesitan mayores evidencias para aceptar el uso Trazabilidad Objetivo: aun siendo autólogo, impedir la transmisión de enfermedades infecciosas (analíticas y requisitos del RD 1088/2005) Farmacovigilancia Comunicación a los Centros de Farmacovigilancia de cada Comunidad Autónoma de las sospechas de reacciones adversas Información Información mínima al paciente sobre calidad, eficacia, ventajas sobre otras terapias, riesgos conocidos y posibles reacciones adversas INFORME/V1/23052013 Ley 29/2006  Medicamento de uso humano.  Producción industrial no aplicable.  No terapia avanzada.  Elaboración para pacientes concretos.
  • 8. Aplicaciones del PRP ARTROSIS: dosis óptima de plaquetas sin definir → Estandarización del medicamento Estudios in vitro Ensayos preclínicos Ensayos clínicos Implantología Pie diabético Ojo seco Esclerosis múltiple Artritis reumatoide Quemaduras Otros: Cirugía oral y maxilofacial Tendón Músculo Cartílago Hueso Alopecia androgénica Cosmética Cirugía vascular
  • 9. Nuestra visión OBJETIVO: Definir la dosis óptima de plaquetas a aplicar en artrosis y en defectos focales de cartílago. Nuestro PRP:  Sin leucocitos Activación con CaCl₂ Sin trombina bovina Hipótesis: 1. Geles de PRP con MSCs para reparar lesiones focales. 2. PRP líquido como agente anti-inflamatorio y condrogénico para frenar y/o revertir la degeneración en artrosis.
  • 10. rpm t (min) 800 8 1000 8 1300 8 6 7 8 6 7 8 6 7 8 5 6 7 5 6 7 2100 8 1400 1500 1600 1700 1800 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 Enriquecimiento 1500 rpm_8' 1600 rpm_7' 1700 rpm_5' 1800 rpm_5' Nuestros estudios: Protocolo de centrifugación • 1700 rpm, 5 min • 1800 rpm, 5 min • 1500 rpm, 8 min • 1600 rpm, 7 min Selección inicial: * Se aumentó n para alcanzar resultados con valor estadístico. 1600 rpm_7’ aporta enriquecimientos significativamente inferiores a las demás condiciones de centrifugación, que son equivalentes entre sí. Selección final: 1700 rpm, 5 minutos t=5 t=6 t=7 t=8 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 800 1000 1300 1400 1500 1600 1700 1800 2100 Enriquecimiento rpm t=5 t=6 t=7 t=8
  • 11. Nuestros estudios: Geles de PRP con MSCs Células viables 0 5 10 15 20 24h 7d 14d 21d 30d %alamarBluereducido Ctrl+ 0.5 1.5 4 0 5 10 15 20 24h 7d 14d 21d 30d %alamarBluereducido Ctrl+ 0.5 1.5 4 0 100 200 300 400 500 600 Ctrl+ 0.5 1.5 4 Expresiónrelativa COLII 14 días 21 días 30 días 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Ctrl+ 0.5 1.5 4 Expresiónrelativa ACAN 14 días 21 días 30 días 0 5 10 15 20 Ctrl+ 0.5 1.5 4 Expresiónrelativa SOX9 14 días 21 días 30 días 0 100 200 300 400 500 600 Ctrl+ 0.5 1.5 4 Expresiónrelativa COLII 14 días 21 días 30 días Expresióngénicarelativa Histoquímicae inmunohistoquímica H-E MM SO-FG COLII AA AT SO COLI 20x Geles estables
  • 12. Nuestros estudios: Estado actual y planes futuros Condrocitos Cartílago reparado MSCs Efecto anti-inflamatorio Efecto condrogénico Defecto focal Explante Modelo de reparación in vitro Gel de PRP con MSCsPRP líquido
  • 13. UNIDAD CIBER-BBN: Dr. Francisco J. Blanco Dra. Elena F. Burguera Grupo de Reumatología INIBIC – Hospital Universitario de A Coruña Universidade de A Coruña Cristina Ruiz Romero Ángela Vela Tamara Hermida Joana Magalhães Noemi Gómez Cristina Álvarez Cristina Rodríguez Colaboradores: GRUPO DE HEMATOLOGÍA: Esther Lourés Fraga José Luis Núñez Amboage PLATAFORMA DE HISTOMORFOLOGÍA: Purificación Filgueira Noa Goyanes Jornada Cátedra BioIbérica de Ingeniería Tisular y Terapia Celular 18 de noviembre de 2015
  • 14. ¡Gracias! Jornada Cátedra BioIbérica de Ingeniería Tisular y Terapia Celular 18 de noviembre de 2015

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