POLIMORFISMO C/T rs5400 DEL GEN SLC2A2 EN POBLACIÓN
INFANTIL CON NIVELES DE GLUCOSA ALTERADA EN
AYUNO
SECRECIÓN DE INSULINA
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Canal de Ca2`
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METABOLISM...
GEN SLC2A2 (GLUT2)
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Kilpeläinen et al., 2007
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3q26.1-26.2
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DM2
Caucásica rs5400 (TT)
(OR 1.49, p=0.0059)
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Niveles de glucosa en ayuno
Parámetros
(edad, sexo, niveles de insulina, IMC, antecedentes obesidad y diabetes)
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Etapa de PCR Temperatura y tiempo
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Desnaturalización del ADN 94°C 30 seg
30ciclos
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poliacrilamida al 6%. Carril 1: Marcador...
Figura 3. Identificación de los genotipos después de la
digestión con la enzima SsiI. Carril 1: Marcador de peso
molecular...
Niveles de glucosa en ayuno
Parámetros
(edad, sexo, niveles de insulina, IMC, antecedentes obesidad y diabetes)
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Cuadro 1. Características de la población
Datos proporcionados en n (%), mediana y percentil 25-75, media±DE, valor p <0.0...
Cuadro 2. Frecuencias genotípicas y alélicas de rs5400 C/T en el gen SLC2A2 en los
grupos de estudio.
Total (n= 150) Gluco...
Cuadro 3. Características somatométricas por genotipo CC y CT de rs5400 del gen
SLC2A2, en población infantil de Chilpanci...
Variable C/C (n=142) C/T (n=8) Valor p
Glucosa (mg/dL) 96 (88-100) 103(97.5-112.5) <0.05 °
Insulina μU/ml
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Célula β normal Célula β susceptible
Obesidad/resistencia a insulina
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Actividad física )
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Secreción de insulina
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Ingesta de alimento
Obesidad
Producción de
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Modelo Crudo Modelo Ajustado°
Variables CC
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OR IC95% p OR IC95% p
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Barroso et al., 2003 modelo
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Willer et al., 2007 asociado
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Polimorfismo C/T (rs5400) del gen SLC2A2 en población infantil con niveles de glucosa alterada en ayuno

Memorias 2013 - 5a Conferencia Científica Anual sobre Síndrome Metabólico - Presentación Tabajos Libres Orales - MÓDULO: EXPRESIÓN CLÍNICA Y TERAPÉUTICA EN SÍNDROME METABÓLICO - Polimorfismo C/T (rs5400) del gen SLC2A2 en población infantil con niveles de glucosa alterada en ayuno * María G. Rodríguez G., Isela Parra R., Silvia E. Flores., Natividad Castro A., Amalia Vences, Aralia B. Salgado B., José F. Muñoz V., Lorenzo Salgado G. (Universidad Autónoma de Guerrero, Unidad Académica de Ciencias Químico-Biológicas, Unidad Académica de Medicina/UIEM, Maestría en Ciencias Biomédicas) PREMIACIÓN: PRIMER LUGAR
Published on: Mar 4, 2016
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Transcripts - Polimorfismo C/T (rs5400) del gen SLC2A2 en población infantil con niveles de glucosa alterada en ayuno

  • 1. POLIMORFISMO C/T rs5400 DEL GEN SLC2A2 EN POBLACIÓN INFANTIL CON NIVELES DE GLUCOSA ALTERADA EN AYUNO
  • 2. SECRECIÓN DE INSULINA Imagen modificada de Tarasov et al., 2004 Canal de Ca2` abierto Despolarizaciòn + - GLUT2 METABOLISMO MITOCONDRIAL INSULINA CANAL DE Ca2+ ABIERTO CIERRE DE CANAL KATP DESPOLARIZACIÓN ATP MgADP ATP MgADP Ca2+ GLUCOSA GLUCÓLISIS >5.5 mmol/l glucosa
  • 3. GEN SLC2A2 (GLUT2) 1 2 3 4 5 11 Exónes 5 3 rs5400 638 C/T Kilpeläinen et al., 2007 promotor 3q26.1-26.2 Treonina Isoleucina C / T (T110I)
  • 4. Estudio realizado Población Resultado Referencia rs5400 (C/T)) asociado a DM2 Caucásica rs5400 (TT) (OR 1.49, p=0.0059) Barroso et al., 2003 Actividad física con: rs5393 (A/C) rs5394 (C/T) rs5400 (C/T) rs5404 (G/A) Finlandesa Haplotipo CTTA de los alelos mutados de rs5393, rs5394, rs5400 y rs5404, con el cambio de actividad física moderada a actividad física vigoroza (p=0.021) Kilpeläinen et al., 2007 Asociación de rs5400 (C/T) con diabetes tipo 2 Finlandesa rs5400 (TT) ( OR= 2.98, IC95%, 1.31-6.79, p= 0.014). Willer et al., 2007 Asociación de rs5400 (C/T) con diabetes tipo 2 Finlandesa y Estadounidense rs5400 (TT) (OR 1.28, IC95% 1.11-1.49, p=0.0023) Gaulton et al., 2008 rs5400 (C/T) asociadas con alta ingesta de carbohidratos en 2 poblaciones. Canadiense rs5400 (CC vs T) visit 1: (112g vs. 86g/día, p =0.01) visita 2: (111g vs. 82g/día p= 0.003) (131g vs. 115g/día, p = 0.007) Eny et al., 2008 ANTECEDENTES
  • 5. Niveles de glucosa en ayuno Parámetros (edad, sexo, niveles de insulina, IMC, antecedentes obesidad y diabetes) Muestra de ADN Glucosa alterada en ayuno (≥100-125 mg/dl) Niveles de glucosa normal (<100 mg/dl) Grupo de Casos Grupo Control Genotipificación PCR-RFLPs Análisis de Resultados (software STATA v.11) Base de datos de la población de estudio Discusión y conclusiones
  • 6. Etapa de PCR Temperatura y tiempo Desnaturalización inicial 94°C 5 min Desnaturalización del ADN 94°C 30 seg 30ciclos Alineamiento de iniciadores 60°C 30 seg Extensión del ADN 72°C 30 seg Extensión final 72°C 3 min Reactivo Concentración inicial Concentración final Volumen H2O ------ ------ 5.5 μl Buffer 10X 1X 1.0 μl MgCl2 50 mM 6.0 mM 1.2 μl dNTP’s 10 mM 0.8 mM 0.8 μl Iniciador sentido 10 μM 0.2 Μm 0.2 μl Iniciador antisentido 10 μM 0.2 μM 0.2 μl Taq polimerasa 50 U/μl 0.5 U/μl 0.1 μl gDNA 100 ng/μl 100 ng/μl 1.0 μl
  • 7. Figura 2. Identificación del polimorfismo rs5400 C/T en el gen SLC2A2 en geles de poliacrilamida al 6%. Carril 1: Marcador de peso molecular de 50 pb, carriles 2-11: productos de PCR de 156 pb, carril 12: control negativo. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 200 150 100 50 156
  • 8. Figura 3. Identificación de los genotipos después de la digestión con la enzima SsiI. Carril 1: Marcador de peso molecular de 50 pb, carril 2: genotipo CT, carriles 3-7: genotipo CC y carril 8: producto PCR sin digerir. CC= 134, 22 pb. CT= 156, 134, 22 pb. TT= 156 pb. Enzima de restricción SsiI Secuencia de restricción 5'... C* C G C ... 3' 3'... G G C *G ... 5' Producto PCR Buffer Enzima H2O Incubación Temperatura Tiempo 0.5 μl 1.5 μl 0.2 μl 7.8 μl 37° C 3 horas 1 2 3 4 5 6 7 8 50 100 150 CCCT
  • 9. Niveles de glucosa en ayuno Parámetros (edad, sexo, niveles de insulina, IMC, antecedentes obesidad y diabetes) Muestra de ADN Glucosa alterada en ayuno (≥100-125 mg/dl) Niveles de glucosa normal (<100 mg/dl) Grupo de Casos Grupo Control Genotipificación PCR-RFLPs Análisis de Resultados (software STATA v.11) Base de datos de la población de estudio Discusión y conclusiones
  • 10. Cuadro 1. Características de la población Datos proporcionados en n (%), mediana y percentil 25-75, media±DE, valor p <0.05 (*X2, °Mann Whitney) Variables Total n=150 Glucosa alterada en ayuno n= 50 Glucosa normal en ayuno n=100 Valor p Edad (años) 9 (7-10) 9 (8-10) 9 (7-10) 0.15 ° Género Masculino Femenino 74 (49) 76 (51) 29 (42) 21 (58) 45 (45) 55 (55) 0.13 * Antecedentes obesidad No Si 66 (44) 84 (56) 22 (44) 28 (56) 44 (44) 56 (56) 1.0 * IMC (kg/m2) <24.9 24.9-28.29 ≥ 28.3 19 (16-23) 127 (85) 16 (10) 7 (5) 21 (17-24) 39 (78) 7 (14) 4 (8) 18 (16-23) 88 (88) 9 (9) 3 (3) 0.05 ° 0.22* Antecedentes diabetes No Si 86 (57) 64 (43) 33 (66) 17 (34) 53 (53) 47 (47) 0.13 * Insulina μU/ml <4.51 4.52-9.547 >9.548 7(4-12) 51 (34) 49 (32.7) 50 (33.3) 7(5-12) 11 (22) 20 (40) 19 (38) 6 (2-11) 40 (40) 29 (29) 31 (31) 0.10 ° 0.08 * Triglicéridos (mg/dL) <150 >150 92 (64-150) 112 (75) 38 (25) 97 (63-150) 36 (72) 14 (28) 92 (64-144) 76 (76) 24 (24) 0.83 ° 0.59* HOMA (mg/dL) 1.50 (0.76-2.80) 1.85 (1.20-3.12) 1.37 (0.58-2.55) <0.05°
  • 11. Cuadro 2. Frecuencias genotípicas y alélicas de rs5400 C/T en el gen SLC2A2 en los grupos de estudio. Total (n= 150) Glucosa alterada en ayuno (n=50) Glucosa normal en ayuno (n=100) Valor p rs5400 C/T Genotipos 0.017 * CC 142 (95) 44 (88) 98 (98) CT 8 (5) 6 (12) 2 (2) TT 0 (0) 0 (0) 0 (0) Alelos C 292 (97) 94 (94) 198 (99) 0.018 * T 8 (3) 6 (6) 2 (1) *X2 con prueba exacta de Fisher, rs5400 x=0.010 p=0.92.
  • 12. Cuadro 3. Características somatométricas por genotipo CC y CT de rs5400 del gen SLC2A2, en población infantil de Chilpancingo, Gro. Variable C/C (n=142) C/T (n=8) Valor p Edad (años) 9 (7-10) 11 (10-11) <0.05° Género Masculino Femenino 69 (49) 73 (51) 5 (62.5) 3 (37.5) 0.49 * Antecedentes obesidad No Si 63 (44) 79 (56) 3 (37.5) 5 (62.5) 1.0 * IMC (kg/m2) <24.9 18.75 (16-23.1) 122 (86) 24.05 (20.1-24.95) 5 (62.5) <0.05 ° 24.9-28.2 ≥ 28.3 13 (9) 7 (5) 3 (37.5) 0 (0) 0.08 * Antecedentes diabetes No Si 83 (58) 59 (42) 3 (37.5) 5 (62.5) 0.29 * Datos proporcionados en n y porcentajes. *Prueba de X2, medianas (p25p75). °Prueba de Mann Whitney
  • 13. Variable C/C (n=142) C/T (n=8) Valor p Glucosa (mg/dL) 96 (88-100) 103(97.5-112.5) <0.05 ° Insulina μU/ml <4.52 4.52-9.54 >9.54 6.6 (3.2-11.5) 50 (35) 48 (34) 44 (31) 13.2 (8.2-15.3) 1 (12.5) 1 (12.5) 6 (75) <0.05 ° 0.06 * Triglicéridos (mg/dL) <150 >150 92 (64-144) 108 (76) 34 (24) 130 (66-188) 4 (50) 4 (50) 0.37 ° 0.11 * HOMA (mg/dL) 1.42 (0.72-2.61) 3.16 (2.24-4.25) <0.05 ° Datos proporcionados en n y porcentajes. *Prueba de X2, medianas (p25p75). °Prueba de Mann Whitney Cuadro 4. Características bioquímicas por genotipo CC y CT de rs5400 del gen SLC2A2, en población infantil de Chilpancingo, Gro.
  • 14. Célula β normal Célula β susceptible Obesidad/resistencia a insulina Ambiente (ac. Grasos/calorías Actividad física ) Incremento de la función de células β. Incremento del crecimiento de célula β Tolerancia normal a la glucosa Hiperinsulinemia compensatoria Disfunción de células β Apoptosis células β Glucosa alterada Diabetes tipo 2 PARTICIPACIÓN DE LAS CÉLULAS β Kahn et al ., 2006
  • 15. Páncreas Secreción de insulina cerebro hígado músculo adipocitos Ingesta de alimento Obesidad Producción de glucosa Eficiencia de la entrada de glucosa Lipolísis NEFAs Resistencia a insulina Glucosa en plasma Glucosa en plasma Resistencia a insulina Función de la célula β ALTERACIÓN EN LA LIBERACIÓN DE INSULINA Kahn et al ., 2006
  • 16. Modelo Crudo Modelo Ajustado° Variables CC n (%) CT n (%) OR IC95% p OR IC95% p Antec. obesidad NO SI 63 (44) 79 (56) 3 (38) 5 (63) 1* 1.33 0.31-5.77 0.70 1.45 0.32-6.55 0.63 Antec. diabetes NO SI 83 (58) 59 (42) 3 (37) 5 (63) 1* 2.34 0.54-10.19 0.26 2.18 0.48-9.87 0.31 IMC (kg/m2) <24.9 122 (86) 5 (63) 1* 24.9-28.29 13 (9) 3 (38) 5.63 1.20-26.30 0.03 4.98 0.99-25.13 0.05 >o = 28.3 7 (5) 0 (0) 3.48 0.06-37.82 0.31 3.48 0.06-37.82 0.31 Glucosa (mg/dl) Normal 98 (69) 2 (25) 1* Alterada 44 (31) 6 (75) 6.68 1.30-34.42 0.02 6.36 1.18-34.37 0.03 Insulina μU/ml 4.52-9.547 48 (34) 1 (13) 1* <4.51 50 (35) 1 (13) 0.96 0.05-15.78 0.98 1.26 0.73-21.88 0.87 >9.548 44 (31) 6 (74) 6.54 0.75-56.53 0.09 6.42 0.72-57.14 0.10 Triglicéridos (mg/dl) <150 108 (76) 4 (50) 1* >150 34 (24) 4 (50) 3.17 0.75-13.38 0.12 2.63 0.59-11.70 0.20 HOMA 1.06-2.29 49 (35) 1 (13) 1* < 1.06 49 (35) 1 (13) 1 0.06-16.44 1.0 1.42 0.82-24.69 0.81 >2.29 44 (30) 6 (74) 6.68 0.77-57.69 0.08 6.76 0.76-60.20 0.09 *Categoría de referencia. Reportado el OR (odds ratio) con un IC (intervalo de confianza) del 95% y un valor de p significativo <0.05. °Ajustado por edad y sexo. Cuadro 5. Asociación de los genotipos de rs5400 con parámetros clínico- bioquímicos
  • 17. Barroso et al., 2003 modelo dominante (OR 1.49, p=0.0059). Willer et al., 2007 asociado con DM2, (OR 2.98; IC95% 1.31-6.79, p= 0.014) Gaulton et al., 2008 asociado con DM2, (OR 1.28, IC95% 1.11- 1.49, p= 0.0023)
  • 18. GRACIAS

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